基因工程原理和技术PDF|Epub|txt|kindle电子书版本网盘下载

基因工程原理和技术PDF格式电子书版下载

注意：本站所有压缩包均有解压码： 点击下载压缩包解压工具

第1章 基因工程概述1

1.1基因工程的定义2

1.2基因工程的诞生和发展2

基因工程的诞生2

基因工程的发展3

1.3基因工程研究的主要内容4

基因工程的基本过程4

基因工程研究的主要内容5

1.4基因工程的研究意义5

基因工程技术在医学领域中的应用5

基因工程在农业领域中的应用7

基因工程在工业领域中的应用8

第2章 基因工程操作的工具酶10

2.1限制性核酸内切酶10

限制性核酸内切酶的发现10

限制性核酸内切酶的分类11

限制性核酸内切酶的命名以及识别特点11

Ⅱ型限制性核酸内切酶的切割方式12

Ⅱ型限制性核酸内切酶的反应条件14

影响限制性核酸内切酶活性的因素14

2.2 DNA连接酶15

连接机理15

DNA连接酶的种类16

DNA连接酶的反应体系16

影响连接反应的因素16

2.3 DNA聚合酶17

大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ17

Klenow片段17

T4噬菌体DNA聚合酶18

T7噬菌体DNA聚合酶与测序酶18

Taq DNA聚合酶18

逆转录酶18

2.4末端脱氧核苷酸转移酶19

2.5 S1核酸酶19

2.6核酸外切酶19

2.7 T4噬菌体多核苷酸激酶20

2.8碱性磷酸酶20

第3章 基因工程载体22

3.1质粒载体22

质粒的基本特性23

质粒载体的必备条件24

常用的质粒载体类型25

3.2 λ噬菌体载体27

λ噬菌体的生物学特性27

常见的λ噬菌体载体的构建28

常见的λ噬菌体载体29

3.3单链DNA噬菌体载体29

M13噬菌体的生物学特性30

常见的M13噬菌体载体31

3.4噬菌粒载体31

3.5黏粒载体31

黏粒载体的基本特点32

黏粒载体的构建32

黏粒载体在基因克隆中的应用32

常用的黏粒载体及应用33

3.6人工染色体33

酵母人工染色体33

细菌人工染色体34

哺乳动物人工染色体34

3.7植物基因工程载体34

质粒转化载体35

植物病毒转化载体35

3.8动物基因工程载体36

SV40病毒载体36

反转录病毒载体37

痘苗病毒载体37

腺病毒载体38

第4章 基因工程基本操作技术39

4.1核酸的提取与纯化39

核酸提取与纯化的基本原理40

植物细胞核DNA的提取41

核外DNA的提取43

RNA的提取45

核酸的纯化47

4.2核酸的检测与保存48

核酸的检测48

核酸的保存49

4.3核酸的凝胶电泳50

琼脂糖凝胶电泳51

聚丙烯酰胺凝胶电泳53

4.4分子杂交技术55

变性和复性55

探针与探针的制备56

Southern杂交58

Northern杂交60

Western杂交61

4.5核酸的序列分析技术62

Maxam-Gilbert碱基顺序分析法62

Sanger碱基顺序分析法63

自动化测序法65

4.6核酸和蛋白互作研究技术65

酵母双杂交技术65

酵母单杂交技术67

噬菌体展示技术68

DNA迁移率变动试验68

DNaseⅠ足迹试验69

4.7通路克隆—Gateway技术69

4.8 RNA干扰技术70

siRNA干扰机理70

siRNA的合成71

细胞和整体生物导入siRNA的方法71

第5章 聚合酶链反应及其相关技术73

5.1 PCR技术的原理73

聚合酶链反应操作过程74

参与PCR反应的成分及其作用75

聚合酶链反应的条件79

聚合酶链反应引物设计原则80

5.2聚合酶链反应技术类型81

已知DNA序列的聚合酶链反应扩增81

逆转录聚合酶链反应81

已知cDNA一段序列获得全长cDNA的聚合酶链反应83

已知序列侧翼聚合酶链反应扩增84

未知序列聚合酶链反应扩增86

聚合酶链反应技术应用90

5.4荧光定量PCR技术90

荧光PCR的特点90

实时荧光定量PCR技术原理91

荧光探针和荧光染料92

第6章 基因文库的构建97

6.1基因组DNA文库的构建97

基因组文库的完备性98

基因组DNA文库的构建98

6.2 cDNA文库的构建99

cDNA文库的构建100

6.3 DNA文库的保存101

第7章 DNA体外重组与重组体的筛选鉴定103

7.1目的基因与质粒载体的连接103

黏性末端的DNA片段的连接103

平末端连接法104

7.2重组克隆载体引入受体细胞105

7.3重组克隆载体导入哺乳动物细胞的转染106

磷酸钙和DNA共沉淀物转染法106

DEAE-葡聚糖介导转染法106

利用聚季铵盐的DNA转染法106

电穿孔法DNA转染107

7.4重组子的筛选与鉴定107

7.5物理检测法110

凝胶电泳检测法111

R-环检测法112

7.6核酸分子杂交检测法112

菌落印迹原位杂交113

斑点印迹杂交113

Southern印迹杂交113

7.7免疫化学检测法114

放射性抗体检测法114

免疫沉淀检测法115

7.8核酸序列测序分析法115

7.9报告基因检测法115

新霉素磷酸转移酶基因116

双氢叶酸脱氢酶基因116

潮霉素磷酸转移酶基因116

氯霉素乙酰转移酶基因116

冠瘿碱合成酶基因116

β-葡萄糖苷酸酶基因117

荧光素酶基因117

第8章 外源基因在大肠杆菌中的表达119

8.1外源基因正确表达的基本条件120

启动子120

转录终止子123

核糖体结合位点123

密码子偏好124

8.2常用的大肠杆菌表达载体125

Lac启动子的表达载体126

trp启动子和tac启动子的表达载体127

PL启动子表达载体129

T7噬菌体RNA聚合酶／启动子表达载体系统132

8.3外源蛋白质表达部位133

细胞质表达133

细胞外周质表达136

细胞外分泌137

融合蛋白138

8.4提高外源基因表达效率的方法140

外源基因的有效转录与外源基因高效表达140

转录的有效延伸和终止与外源基因高效表达141

有效的翻译起始与外源基因高效表达141

终止密码子选择与外源基因高效表达142

外源蛋白的稳定性与外源基因高效表达142

8.5表达产物的检测143

含有报告基因的融合蛋白表达的检测143

免疫技术143

Western杂交144

第9章 酵母菌和丝状真菌基因工程145

9.1酵母菌的基因工程145

酵母菌的宿主系统145

酵母菌的载体系统149

酵母菌的转化系统151

常用的酵母表达系统154

酵母菌的蛋白修饰分泌系统158

9.2丝状真菌的基因工程161

丝状真菌161

丝状真菌的DNA遗传转化系统162

丝状真菌载体质粒的构建164

外源蛋白在丝状真菌的表达166

第10章 转基因植物168

10.1目的基因的分离和鉴定168

人工合成168

序列克隆法168

功能克隆法169

差异表达分析法170

10.2植物表达载体——启动子170

组成型启动子170

组织特异性启动子171

诱导型启动子172

10.3目的基因的转化方法173

间接转化法173

直接转化法174

10.4转基因植物的筛选与检测175

转基因植物的筛选176

外源基因表达的检测176

10.5转基因植物中外源基因的沉默179

转录水平上的外源基因沉默（TGS）179

转录后水平上外源基因的沉默（PTGS）180

10.6植物转基因沉默防止与抑制策略181

转化前防止策略181

转化后抑制策略183

10.7转基因植物的安全性和对策183

抗性标记基因的剔除技术184

安全标记基因185

无标记基因的安全策略185

10.8转基因植物的应用186

转基因植物的应用186

转基因植物研究发展趋势187

第11章 转基因动物190

11.1生产转基因动物的关键技术190

原核显微注射法190

胚胎干细胞法191

逆转录病毒感染法191

精子载体法192

体细胞核移植法193

转基因技术与其他生物新技术的结合193

11.2转基因动物的检测194

染色体和基因水平194

转录水平194

翻译水平195

其他196

11.3转基因动物技术存在的问题196

外源目的基因在宿主基因组中的行为难以控制196

转基因动物技术给动物带来的危害197

转基因动物的成功率和成活率极低，生产成本高197

转基因动物的安全性问题197

11.4提高外源目的基因的整合效率和表达水平的方法198

外源目的基因的整合效率和定位198

外源目的基因的高效表达及调控元件199

11.5转基因动物乳腺生物反应器200

11.6转基因动物的应用201

建立诊断和治疗人类疾病的动物模型201

用转基因动物生产药用蛋白201

生产可用于人体器官移植的动物器官202

基因动物在培养家畜新品种方面的应用202

展望202

第12章 转基因生物安全204

12.1基因工程实验室安全性的基本要求204

基因工程实验室重组DNA存在的潜在危害204

基因工程安全等级的划分及安全控制措施205

12.2基因工程产品释放的规则及要求206

基因工程药物投放的规则和要求206

转基因植物品种的释放要求207

ISO认证208

12.3现代生物技术专利208

12.4基因工程产品的安全性问题210

环境安全性210

转基因食品安全性问题212

主要参考文献214