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组织培养的发展1

目录1

第一设备5

一、实验室5

二、装置及器械7

（一）装置7

（二）玻璃器材10

（三）金属器材14

（四）其他器材15

三、器械的清洗、消毒及涂蜡17

第二盐液、营养液、综合营养液20

一、盐液20

（一）生理盐水20

（二）Ringer氏液（1895）20

（三）Locke氏液（1901）21

（五）Tyrode氏盐液（1910）22

（四）Pannett及Compton氏（1924）盐液22

（六）Tyrode-Fleische氏液24

（七）Drew氏液25

（八）Simms氏X6,X7,z液（1942）25

（九）Gey氏液（1949）26

（十）Earle氏液（1948）26

（十一）Hanks氐盐液（1949）27

（十二）Dulbecco氏磷酸缓冲盐液（1954）27

（十三）Glucosol液28

（十四）Holtfreter氏液（1931）28

二、营养液31

（一）组织浸液31

1．鸡胎汁31

2．其他动物的胎汁33

4．浸出液的干冻34

2．脾及胸腺浸汁34

3．人胎的肝、脾、心脏浸汁34

（二）器官浸液34

1．骨髓汁34

（三）血浆35

1．鸡血浆35

（1）翼下静脉取血35

（2）颈静脉取血35

（3）颈动脉取血36

（4）心脏取血37

3．鱼血浆38

（5）翼根静脉取血38

2．鸡胎血浆38

4．？血浆39

5．蛙血浆39

6．猫血浆40

（四）血清41

11．胎盘血浆41

10．人血浆41

9．小白鼠血浆41

8．兔血浆41

7．犬血浆41

1．牛、马血清42

2．鸡血清42

3．人血清42

4．鹿血清42

5．血清超滤液43

（五）其他液体43

1．眼房水43

2．白血细胞浸液43

3．人腹水43

4．淋巴43

5．羊水44

三、综合营养液44

（一）19945

1．Morgan、Morton及Parker等氏（1950）配法45

2．中国医学科学院病毒系配法49

3．按长春生物制品研究所之配法52

（二）Morgan等氏M 150及M 416（1955,1956）57

（三）氨基酸溶液（Bergmann及Niemann 1936）58

（四）V-614（1958）59

（五）703（1954）60

（六）858（Healy,1955,1956）63

（七）Eagle综合营养液（1955）67

（八）Eagle氏综合液（1959）69

（九）NCTC 107（1954）72

（十）NCTC 108及NCTC 10977

（十一）“ML 6”,“ML 97”,“ML 94/4”及“ML 192/2”（1956）78

（十二）25681

（十三）Syverton氏综合营养液（1954）82

（十四）乳白蛋白及血清白蛋白84

（十五）Fischer氏半综合营养液（1949）85

（十六）Edlinger氏等半综合液（1958）86

（十七）器官培养液（Trowell氏T8）87

（十八）Gautheret氏植物根培养液（1942）89

（十九）White氏营养液（1942）90

（二十）悬浮植物细胞营养液（1956）91

（二十一）周嘉槐改良White氏液93

（二十二）Heller氏改良液94

（二十三）Siu氏培养液94

第三 培养96

一、培养时的注意96

二、培养方法99

（一）悬滴培养99

1．单盖片法102

2．双盖片法103

3．简单悬滴培养103

4．改良的悬滴培养103

5．透明膜培养104

6．瓶加盖片培养106

7．悬滴培养的培基107

（二）錶玻璃培养法108

（三）平皿培养法109

（四）玻瓶培养法109

1．Carrel氏瓶培养法109

2．球瓶培养法113

3．T瓶培养114

（1）细胞悬液的制法114

1）Shannon等氏法（1952）114

2）Moscona氏法（1952）114

3）丁正荣、庞海进、冯永贞及韦家槐等法（1962）115

4）曾毅、毛江森等的人羊膜细胞培养法（1963）116

（2）细胞计数117

（3）培养117

（4）结果117

4．用有孔玻璃纸的玻瓶培养117

2．器材119

1．简史119

（五）转管培养法119

3．盐液及营养液121

4．培养法123

（1）？e？ábek法123

（2）Lewis及Gey氏法123

（3）Feller氏法123

（4）Hintzsche氏法123

（5）直接培养于管壁法123

（6）胶原凝质的转管培养124

（7）转管加透明膜盖片培养法125

（8）转管加立体作用物培养法126

5．再培养127

（六）冲洗小室127

1．Pomerat氏冲洗小室（1951）128

2．Stadelmann氏简单冲洗小室（1959）129

3．郭可大冲洗小室（1951）131

4．陈瑞铭简易冲洗小室（1963）132

第四恒久细胞株及细胞纯株134

一、Sanford等（1948）成纤维细胞纯株的分离145

二、Sanford简易毛细管培养细胞法（1961）147

三、Puck等细胞纯株的分离（1956）149

四、Aronson等用玻璃小珠培养悬浮细胞（1960）152

五、何申等细胞纯株515的培养（1962）153

第五定量的培养155

一、Syverton等HeLa细胞的培养（1954）155

三、Edlinger氏简单方法（1958）162

四、Walker氏肉瘤细胞256的培养（1956）162

五、Osgood氏分度法的培养164

六、人骨髓基质细胞的培养（1955）170

第六空斑培养法173

第七悬浮培养176

一、转管中L细胞的悬浮培养（1951）176

二、L细胞悬液培养（1956）177

三、McLimans等（1957）悬浮细胞的培养177

第八器官培养179

一、Martinovich氏器官组织培养179

二、Fell氏胚胎骨的培养180

三、Gaillard人甲状旁腺的培养180

四、Gaillard氐人卵巢的培养182

五、Trowell氏湿室中淋巴结的培养（1952,1955）183

六、各种器官用综合营养液（Trowell 1959）T8的培养184

七、Miizima氏牙原基的培养（1956）186

八、肝脏的培养（1961）189

九、器官培养应用滤纸层析装置190

第九植入法192

一、组织片植入眼前房（1951）192

二、悬浮细胞的植入法（Plum 1950）193

三、鸡胚绒毛膜尿囊的培养（1951）193

四、鸡胚胎膜的培养194

第十无脊椎动物组织的培养195

一、材料196

三、盐液及营养液197

1．Ephrussi-Beadle氏盐液（1925）197

二、组织的采取197

3．Clark氏液198

4．Bohuslav及Koniěek氏液（1933）198

2．Rogers氏液（人工海水，1927）198

6．Trager氏液（1935）200

7．Fischer及Gottschewski氏液（1939）200

5．Trager氏液（1935）200

8．Hédon-Fleig氏液201

9．Gaulden及Carlson氏液（1951）201

10．黑田氏液（1955）202

11．Grace氏液（1958）203

12．Wyatt氏液204

13．Vago及Chastang氏液（1958）206

14．高见氏液（1958）206

15．Trager氏液（1959）207

（一）盖片法208

四、培养法208

1．Gatenby氏法（1993）208

16．北村氏液（1960）208

（二）转管培养209

4．Gavrillov及Cowey氏法（1941）209

（三）定量培养209

Martignoni等氏法（1958）209

3．Fischer及Gottschewski氏法（1939）209

2．Bohuslav（1933）及Koniěek氏法（1933）209

第十一植物组织培养211

一、芽根的培养211

三、形成层组织的培养214

（一）根及根茎214

二、离体根的培养214

（二）树木的形成层218

四、形成层培基的再培养219

五、愈合组织的培养222

六、悬浮细胞的培养223

七、细胞纯株的培养225

第十二培养物的处理227

一、培基重量的测定227

二、培基面积的测定227

三、细胞量及核量的测定231

四、磷酸的分析233

（一）核酸磷的测定233

（二）核酸磷测定改良法234

（三）DNA及RNA的测定234

（四）总嘌哈及总嘧啶的测定236

五、总蛋白量的分析238

（一）有丝分裂数的测定241

（二）Stathmokinetic Index241

（三）有丝分裂过程的分析241

六、有丝分裂的活动性241

七、培养物检查法242

（一）生活观察242

2．萤光显微镜检查243

3．活体染色243

1．相差显微镜及3D聚光器检查243

1．完全标本247

（1）固定及固定液247

（二）光学显微镜检查247

（2）染色剂及染色法249

2．切片标本262

（三）电子显微镜检查法264

（四）自摄影术268

第十三上皮组织273

一、蛙的皮肤273

二、常温动物的上皮组织277

三、各种上皮组织的培养280

四、培养中上皮组织的特性289

第十四结缔组织292

一、间充质295

二、网状细胞299

三、骨髓细胞302

四、淋巴球的培养305

五、吞噬现象及巨噬细胞的形成306

六、生活细胞的分裂及其含有物的出现307

七、细胞的死亡现象316

一、软骨细胞318

二、软骨及骨318

第十五软骨及骨318

三、骨的再生320

第十六肌组织324

一、平滑肌324

二、心肌细胞326

三、骨骼肌纤维330

四、成年动物的平滑肌331

五、肌纤维的收缩333

第十七神经组织337

一、脑及脊髓343

二、交感神经节345

三、神经胶质细胞的一般培养345

四、星状神经胶质细胞及少突神经胶质细胞的培养349

第十八肿瘤组织的培养353

一、肿瘤细胞的结构及其特性353

五、神经纤维的变性及再生………………………………35l353

二、肿瘤细胞的增生方式359

三、肿瘤组织的培养362

（一）Fischer氏法364

（三）Gey氏人癌瘤组织转管培养法365

（四）Allg？wer的干燥培基培养法365

（二）人癌肿的培养（Orr及Mc Swain,1955）365

主要参考书及杂志366

中文索引368

二、Youngner用胰蛋白酶作成肾细胞悬液的培养1954