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第一篇 电子显微镜方法1

第1章 电子显微镜的基础知识1

1.1 电子显微镜的发展过程1

1.1.1 光学显微镜的局限2

1.1.2 电子显微镜的产生基础3

1.1.3 电镜中的信号物质8

1.1.4 电镜的发展概况8

1.2 电子透镜的光学参量和基本公式10

1.3 电子透镜的聚焦性能12

1.3.1 静电透镜12

1.3.2 磁透镜15

1.4 电子透镜的像差19

1.5 景深和焦深25

第2章 透射电子显微镜29

2.1 透射电镜的基本原理29

2.2 透射电镜的组成结构30

2.2.1 照明系统30

2.2.2 样品室36

2.2.3 成像系统37

2.2.4 观察和记录系统40

2.2.5 真空系统41

2.2.6 其他45

2.3 透射电子像的衬度45

2.3.1 振幅衬度——散射“吸收”衬度45

2.3.2 明场和暗场成像方法47

2.3.3 相位衬度49

2.4 电镜中的电子衍射50

2.5 透射电子像的分辨率53

2.6 透射电镜的使用56

第3章 扫描电子显微镜60

3.1 扫描电镜的基本原理60

3.2 扫描电镜的组成结构62

3.2.1 照明系统62

3.2.2 扫描系统67

3.2.3 聚焦系统68

3.2.4 探测系统70

3.2.5 显示系统72

3.2.6 其他73

3.3 扫描电镜中的主要像衬度73

3.3.1 二次电子像的衬度74

3.3.2 背散射电子像的衬度78

3.3.3 像衬度的模拟量处理82

3.4 扫描电子像的分辨率82

3.4.1 电子探针的直径83

3.4.2 样品的衬度特性83

3.4.3 信号电子的取样区84

3.5 扫描电镜的使用85

第二篇 标本制备方法88

第4章 透射电镜样品制备技术88

4.1 超薄切片法88

4.1.1 取材89

4.1.2 固定90

4.1.3 清洗与脱水97

4.1.4 浸透与包埋98

4.1.5 超薄切片前的准备工作109

4.1.6 超薄切片111

4.1.7 超薄切片染色115

4.1.8 和切片染色有关的几个方法介绍116

4.2 负染色法119

4.2.1 负染色剂120

第5章 电镜细胞化学126

5.1 电镜细胞化学原理126

5.2 电镜细胞化学样品制备的一般过程126

5.3 氧化还原酶127

5.3.1 琥珀酸脱氢酶127

5.3.2 细胞色素氧化酶129

5.3.3 过氧化物酶130

5.3.4 过氧化氢酶131

5.3.5 单胺氧化酶132

5.4 转移酶134

5.4.1 胆碱乙酰转移酶134

5.4.2 糖基转移酶135

5.5 水解酶136

5.5.1 乙酰胆硷酯酶137

5.5.2 碱性磷酸酶137

5.5.3 酸性磷酸酶138

5.5.4 葡萄糖-6-磷酸酶140

5.5.5 5′—核苷酸酶141

5.5.6 硫胺素焦磷酸酶141

5.5.7 N5+-K+-ATP酶142

5.6 裂解酶——碳酐酶144

第6章 免疫电镜方法146

6.1 固定与包埋147

6.1.1 固定147

6.1.2 包埋（环氧树脂）149

6.2 免疫电镜标记物152

6.2.1 胶体金（胶体金制备，蛋白质一胶体金复合物制备）152

6.2.2 铁蛋白156

6.2.3 HRP157

6.3 免疫电镜中的分子桥技术158

6.3.1 种属特异抗体159

6.3.2 蛋白A159

6.3.3 生物素与抗生物素蛋白159

6.3.4 不标记抗体161

6.4 免疫标记过程161

6.4.1 包埋前法162

6.4.2 包埋后法163

6.5 非特异性与对照实验164

6.5.1 非特异结合及其阻断方法164

6.5.2 对照实验165

6.6 扫描电镜免疫细胞化学166

6.6.1 标记物及成像原理166

6.6.2 样品制备168

6.7 电镜原位杂交169

6.7.1 原理170

6.7.2 核酸探针170

6.7.3 探针的标记170

6.7.4 探针的显示171

6.7.5 样品制备171

6.7.6 杂交前的预处理173

6.7.7 杂交173

第7章 电镜方法中的冷冻技术176

7.1 冷冻断裂与冷冻蚀剂176

7.1.1 样品预处理177

7.1.2 冷冻178

7.1.3 断裂179

7.1.4 蚀刻180

7.1.5 喷镀181

7.1.6 复型膜的分离与捞取182

7.1.7 复型膜上裂面的命名182

7.2 冷冻超薄切片182

7.2.1 固定182

7.2.2 包裹182

7.2.3 冷冻保护183

7.2.4 冷冻183

7.2.5 切片183

7.2.6 染色187

7.2.7 制备冷冻超薄切片的干法187

7.3 冷冻置换188

7.3.1 冷冻188

7.3.2 置换189

7.3.3 包埋189

7.3.4 切片和染色189

第8章 电镜放射自显影190

8.1 原理190

8.2 样品的标记191

8.3 乳胶涂布，曝光与显影192

8.4 分辨率194

第9章 扫描电镜标本制备方法196

9.1 暴露196

9.2 干燥197

9.2.1 临界点干燥法197

9.2.2 冷冻干燥法202

9.3 表面导电层的复盖204

9.3.1 金属真空喷镀法205

9.3.2 金属离子溅射镀膜法207

9.4 扫描电镜特殊标本制备方法209

9.4.1 血管铸型法209

9.4.2 分散细胞的扫描电镜标本制备方法212

9.4.3 对组织切面的观察——割断法216

9.4.4 表面标记技术（免疫扫描电镜方法）218

第三篇 电子显微镜进展222

第10章 电子探针X射线微区分析222

10.1 特征X射线及连续X-射线223

10.2 仪器结构特点225

10.2.1 电子光学系统225

10.2.2 样品室225

10.2.3 谱仪225

10.3 标本制备方法227

10.4 超薄切片的定量X-射线微区分析231

10.5 X射线微区分析在生物医学中的应用234

10.6 X射线微区分析方法的优缺点235

第11章 其它类型电子显微镜238

11.1 能量损失谱仪238

11.2 俄歇电子谱仪239

11.3 扫描透射电子显微镜240

11.4 超高压电子显微镜240

附、第12章 扫描探针显微镜242

12.1 扫描隧道显微镜243

12.2 扫描力显微镜245