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第一章 核酸的生物化学1

第一节 核酸概述1

一、核酸的发现1

二、核酸的分类2

三、核酸的功能2

第二节 核酸的分子组成2

一、元素组成2

二、核酸的基本结构单位——核苷酸2

第三节 核酸的分子结构6

一、核酸中核苷酸的连接6

二、DNA的分子结构8

三、RNA的分子结构11

一、核酸的酸碱性质15

第四节 核酸的理化性质15

二、核酸的高分子性质16

三、核酸的紫外吸收16

四、核酸的变性和复性16

第五节 DNA的生物合成18

一、DNA生物合成的概念18

二、DNA的复制合成18

三、反转录合成24

四、DNA的修复合成25

第六节 RNA的生物合成25

一、RNA生物合成的概念25

二、转录体系的组成26

三、转录过程28

四、转录后加工过程28

第一节 PCR的基本原理34

第二章 基因扩增及其相关检测技术34

一、模板核酸36

二、引物36

三、缓冲液36

四、Mg2+36

五、三磷酸脱氧核苷酸（dNTP）36

六、耐热DNA聚合酶36

第二节 PCR反应的基本条件及其对PCR的影响36

七、温度和循环参数37

第三节 PCR扩增产物的分析法37

四、PCR-ELISA法38

第四节 PCR反应相关检测技术38

五、荧光探针标记法38

三、微孔板夹心杂交法38

二、点杂交38

一、凝胶电泳分析法38

一、原位PCR技术39

二、标记PCR和彩色PCR39

三、反向PCR39

四、不对称PCR40

五、多重PCR40

第五节 其它基因扩增检验技术40

一、连接酶链反应40

二、依赖核酸序列的扩增41

三、转录依赖的扩增系统41

四、Qβ复制酶反应42

五、bDNA42

二、影响PCR结果的因素45

一、PCR实验包括的步骤45

第一节 PCR技术45

第三章 聚合酶链反应测定的技术要点45

第二节 PCR的应用46

一、在感染疾病中的应用47

二、PCR在诊断病原体感染时的优缺点47

第三节 PCR假阳性或假阴性的预防和对策47

一、对产物污染的预防47

二、对于交叉污染、培养物及其它污染的预防应采取综合性防范措施49

三、出现污染现象后的措施49

四、假阴性的预防及对策49

第四节 实验设备及试剂的规范化和标准化49

一、实验室设置及设备的规范化49

二、实验试剂的标准化49

三、操作人员的要求50

第四章 临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收52

第一节 临床标本的接收52

第二节 基因扩增检验实验室设置的一般要求及工作流程52

一、试剂准备区53

二、标本制备区53

三、扩增区54

四、产物分析区54

第三节 有关临床基因扩增检验实验室技术验收有关问题的解释55

一、实验室设置和设备55

二、设施和环境55

三、人员55

九、质量控制56

八、报告56

七、记录56

五、检测方法56

四、设备管理和质控物56

六、标本管理56

十、抱怨57

十一、其它有关技术验收的内容57

第四节 临床基因扩增检验实验室如何准备技术验收57

第五章 临床基因扩增检验标本的处理、保存及核酸提取方法66

第一节 临床标本的处理和保存66

一、血清（浆）标本66

二、全血标本66

六、脓液67

八、组织67

七、体液67

五、棉拭子67

四、痰67

三、外周血单个核细胞67

第二节 核酸的提取方法68

一、DNA提取的经典方法68

二、RNA的提取69

三、核酸提取的改良方法71

一、结核分枝杆菌（TB）78

第一节 关于结核分枝杆菌等几项检测的具体应用78

第六章 PCR测定的临床应用及测定结果的临床意义78

二、沙眼衣原体（Ct）79

三、HBV-DNA80

四、HCV-RNA81

五、人类组织相容性抗原（HLA）81

第二节 遗传病检测82

一、PCR结合等位基因特异性寡核苷酸（ASO）探针法82

第三节 肿瘤研究中的分子生物学检测83

四、单链构象多态分析（PCR-SSCP）83

二、PCR扩增特异等位基因（PASA）83

三、限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）83

第四节 临床应用评价应注意的共同问题84

一、假阳性和假阴性84

二、阳性率与“金标准”84

三、临床实践是判断PCR结果的最重要依据84

第七章 基因扩增检验技术在遗传病诊断及基因配型中的应用88

第一节 基因扩增检验技术在遗传病诊断中的应用88

一、基因探针技术的应用88

二、PCR技术及其在遗传病基因诊断中的应用88

三、无创产前基因诊断技术91

四、生物芯片技术91

五、展望91

第二节 PCR技术在HLA-DRB1基因配型中的应用92

第二节 定量PCR方法98

第一节 PCR扩增的理论模式98

第八章 定量聚合酶链反应测定技术及其临床应用98

一、使用外标准的定量PCR方法99

二、动力学方法99

三、内标定量方法100

第三节 定量PCR测定的临床应用及应注意的问题101

第九章 临床基因扩增检验实验室常用仪器设备105

第一节 PCR热循环仪（DNA扩增仪）105

一、PCR扩增仪的原理及发展状况105

二、PCR扩增仪的使用与保养109

三、国内常见荧光定量PCR仪介绍110

第二节 高速／冷冻离心机111

一、使用方法112

二、注意事项112

四、几种高速离心机性能介绍113

三、维护和保养113

第三节 加样器（移液器）114

一、加样器的类型114

二、加样器的技术指标115

三、加样器的使用116

四、加样器的性能测试119

五、加样器的校准——加样器校准标准操作程序（SOP）119

六、注意事项121

七、维护122

八、故障排除122

第四节 洗板机122

一、洗板机机理的研究123

二、洗板机的发展状况123

三、国内常见洗板机简介123

四、选购洗板机的注意事项124

五、洗板机使用中的注意事项125

第十章 PCR热循环式核酸扩增仪128

第一节 简介128

第二节 核酸扩增反应仪128

一、PCR仪的由来和发展128

二、选用PCR仪的标准129

三、选用优化的PCR程序的重要性130

四、如何测定热循环仪孔与孔之间的差别131

五、使用热循环仪的几个基本注意要点132

六、精密度（Precision）136

五、偏差（Bias）136

四、准确度（Accuracy）136

三、室间质量评价（ExternalQualityAssessment,EQA）136

二、室内质量控制（InternalQualityControl,IQC）136

一、质量保证（QualityAssurance,QA）136

第一节 定义136

第十一章 临床基因扩增检验的质量保证136

七、重复性条件（RepeatabilityConditions）137

八、批（Run）137

九、均值（Mean）137

十、标准差（StandardDeviation,SD或s）137

十一、变异系数（CoefficientofVariation,CV）137

十二、正态分布（GaussianDivtribution）137

第二节 质量保证、室内质控和室间质评之间的关系138

第三节 标本收集、运送、保存及其质量控制139

一、标本收集139

第四节 室内质量控制（IQC）140

三、标本运送140

二、标本保存140

一、测定前质量控制141

二、核酸样本的制备、扩增检测及其质量控制143

三、统计学质量控制145

四、室内质控数据的评价155

五、室内质控的局限性155

第五节 室间质量评价（EQA）155

一、EQA的程序设计155

二、EQA的局限性160

第十二章 临床聚合酶链反应试剂盒的选用和质检164

第一节 PCR或RT-PCR试剂盒的组成164

第二节 影响PCR试剂盒质量的因素164

一、核酸提取方法164

三、核酸扩增方法165

二、核酸扩增所需的原材料165

五、试剂盒的运输和贮存166

第三节 临床PCR试剂盒的分类166

第四节 临床PCR试剂盒的选用原则166

四、产物检测166

第五节 临床PCR试剂盒的质检167

一、内、外包装的质检167

二、试剂盒测定性能的质检167

第十三章 临床基因扩增检验技术的进展171

第一节 探针杂交技术171

一、荧光探针标记技术171

二、酶标记探针杂交技术172

第二节 UNG防污染技术172

二、核酸提取的标准化和自动化技术173

第三节 其它相关技术173

一、内标准技术173

第十四章 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》的解释说明176

第一节 《办法》管辖的基因扩增检验方法176

第二节 临床基因扩增检验项目的申报和审定177

第三节 实验室设置审批177

第四节 实验室工作人员的资格和培训单位的审定177

第五节 对违反本办法的医疗机构和实验室的处罚178

第六节 实验室的监督管理单位178

附录1 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法临床基因扩增检验实验室基本设置标准183

附录2 临床基因扩增检验实验室工作规范185

附录3 临床基因扩增检验实验室技术验收申请表192

附录4 临床基因扩增检验实验室技术验收报告194