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第一编 概述2

第一章 生命大分子物质的制备2

第一节 材料的选择与处理2

一、材料的选择2

二、材料的处理3

第二节 测定方法的确立4

一、目的与要求4

二、常用的测定方法4

第三节 细胞破碎7

一、机械破碎7

二、溶胀和自溶8

三、化学处理8

四、生物酶降解8

第四节 抽提9

一、抽提的含义9

二、抽提有效成分的影响因子9

第五节 浓缩12

一、沉淀法12

二、吸附法12

三、超过滤法12

四、透析法13

五、离心法13

六、干燥法13

第六节 纯化方案的设计与评价14

一、纯化方案的设计14

二、纯化方案的评价15

第七节 有效成分纯度和性质的分析16

第八节 应用实例16

一、高纯度人转铁蛋白的制备16

二、叶绿体的提取与4.5S RNA的制备16

三、细菌质粒DNA的提取17

思考题17

参考文献17

第二编 纯化方法20

第二章 沉淀法20

第一节 基本原理与沉淀类型20

一、基本原理20

二、制备蛋白质20

三、制备核酸29

第二节 应用实例32

一、脾磷酸二酯酶的纯化32

二、细菌染色体DNA的制备32

三、蔗糖酶的初步纯化33

思考题33

参考文献34

第三章 吸附层析35

第一节 吸附柱层析36

一、常用术语36

二、基本原理37

三、吸附剂38

四、洗脱液41

五、层析柱的制备与层析操作41

六、应用与实例43

第二节 薄层层析45

一、操作及注意事项46

二、应用实例51

第三节 聚酰胺薄膜层析52

一、基本原理52

二、应用实例53

思考题56

参考文献57

第四章 疏水层析58

第一节 基本原理58

一、疏水作用58

二、吸附剂59

第二节 操作与应用59

一、层析柱的制备59

二、加样与洗脱60

三、应用实例60

思考题62

参考文献62

第五章 离子交换层析63

第一节 基本原理63

第二节 离子交换剂的分类及性质65

一、分类65

二、性质71

第三节 离子交换剂与缓冲液的选择78

一、离子交换剂的选择78

二、缓冲液的选择79

三、加样量的确定82

第四节 操作82

一、离子交换剂的处理、再生和转型82

二、分离物质的交换83

三、物质的洗脱与收集84

第五节 应用86

一、制备、纯化生命物质86

二、测定蛋白质的等电点89

思考题89

参考文献90

第六章 凝胶过滤91

第一节 凝胶的分类及性质91

一、葡聚糖凝胶92

二、琼脂糖凝胶94

三、聚丙烯酰胺凝胶95

四、Sephacryl96

五、Superdex97

第二节 基本原理97

第三节 操作100

一、凝胶的选择和处理100

二、凝胶柱的制备101

三、加样与洗脱102

四、凝胶柱的再生及保存106

第四节 应用106

一、脱盐和浓缩106

二、分离生命物质107

三、去除热源物质108

四、测定分子质量108

五、其他111

思考题111

参考文献111

第七章 亲和层析112

第一节 基本原理112

第二节 操作114

一、载体的选择114

二、配体的选择115

三、亲和吸附剂的制备116

四、特异性吸附118

五、分离大分子物质120

六、亲和层析柱的再生121

第三节 提高吸附剂的操作容量121

一、在配体和载体间引入“手臂”121

二、增加配体取代的程度123

三、配体与载体衍生物以最少的键连接123

四、载体多孔性的影响123

五、其他124

第四节 应用实例124

一、纯化大分子物质124

二、研究酶的结构与功能127

三、实例128

思考题131

参考文献131

第八章 聚焦层析132

第一节 基本原理132

一、多缓冲剂和多缓冲交换剂132

二、聚焦层析原理133

第二节 操作136

一、多缓冲剂的选择136

二、多缓冲交换剂用量的确定136

三、多缓冲交换剂的处理137

四、样品的准备137

五、加样和洗脱137

六、样品中多缓冲剂的去除138

第三节 应用138

一、分离模型蛋白质138

二、分离复杂物质139

三、鉴定某些酶的性质140

思考题141

参考文献141

第九章 高效液相色谱142

第一节 基本原理143

一、高效液相色谱仪143

二、固定相145

第二节 反相高效液相色谱148

一、固定相、流动相和色谱柱149

二、纯化糖基化白蛋白肽片段151

第三节 应用153

一、定性和定量分析153

二、测定酶活性154

三、测定蛋白质分子质量154

四、分离核酸和蛋白质155

思考题160

参考文献160

第十章 固定化的酶与微生物161

第一节 制备方法162

一、固定化酶162

二、固定化微生物165

三、生物传感器166

第二节 制品的性质167

一、酶的相对活性167

二、活性曲线与最适pH168

三、稳定性169

四、米氏常数170

五、其他170

第三节 应用实例171

一、工业方面171

二、医学方面174

三、生化分析方面175

四、应用实例177

思考题179

参考文献179

第三编 鉴定方法182

第十一章 标记182

第一节 核酸标记182

一、基本原理182

二、标记方法183

第二节 蛋白质标记189

一、机制190

二、类型190

三、标记物制备191

第三节 标记物的纯化与鉴定195

一、标记物纯化196

二、探针的鉴定197

第四节 应用实例201

一、cDNA组学和蛋白质组学201

二、激酶的磷酸化和脱磷酸化205

三、蛋白质半衰期的测定206

思考题207

参考文献207

第十二章 重组DNA208

第一节 重组DNA的部件208

一、工具酶208

二、载体211

三、目的基因213

第二节 重组218

一、黏性末端连接法219

二、平端连接法220

三、平黏连接法221

四、T-A连接法221

五、同聚物加尾连接法221

六、人工接头连接法221

第三节 DNA扩增223

一、重组DNA导入宿主细胞223

二、重组子的筛选与鉴定225

三、表达产物的纯化227

第四节 应用实例227

一、分离总RNA和mRNA228

二、反转录合成第一链cDNA228

三、PCR扩增及其产物纯化228

四、PCR产物的克隆229

五、重组质粒的提取及分析229

思考题230

参考文献230

第十三章 DNA序列测定231

第一节 双脱氧链终止法231

一、基本原理231

二、载体系统232

三、测序试剂236

四、测序操作238

五、变性电泳241

六、序列读取242

第二节 PCR法242

一、直接测序243

二、循环测序244

三、应用实例245

第三节 化学降解法246

一、测序原理246

二、具体操作247

第四节 新一代测序法250

一、第二代测序法250

二、第三代测序法252

思考题253

参考文献253

第十四章 生物芯片254

第一节 基因芯片254

一、基本原理和工作流程254

二、制备及操作257

三、应用实例262

第二节 蛋白质芯片267

一、原理及特点267

二、制备与操作268

三、应用实例270

第三节 芯片实验室273

一、结构与制作273

二、应用实例276

思考题282

参考文献282

第十五章 聚合酶链反应283

第一节 基本原理及操作系统283

一、扩增DNA283

二、扩增RNA290

第二节 PCR的类型294

一、普通PCR294

二、原位PCR295

三、反转录PCR295

四、反向PCR295

五、不对称PCR296

六、巢式PCR296

七、彩色PCR297

第三节 应用297

一、筛选目的基因297

二、直接测序297

三、标记DNA探针298

四、寻找新基因298

五、检测血液和组织成分298

六、检测环境中的致病菌与指示菌298

思考题299

参考文献299

第十六章 电泳300

第一节 基本原理301

一、泳动度概念301

二、影响泳动度的因子302

第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳303

一、基本原理303

二、不连续垂直板状和柱状凝胶电泳309

三、连续的垂直板凝胶的电泳319

四、线性和阶梯式梯度的板状凝胶电泳320

五、双向电泳322

第三节 琼脂糖凝胶电泳323

一、缓冲液的配制324

二、琼脂糖胶板的制备324

三、加样和电泳325

四、观察325

第四节 应用325

一、测定分子质量326

二、测定蛋白质等电点328

三、鉴定微量物质333

四、诊断疾病（转移电泳）336

思考题339

参考文献339

第十七章 免疫分析340

第一节 抗体的性质、制备及纯化340

一、抗体的性质340

二、多克隆抗体的制备341

三、单克隆抗体的制备346

四、抗体的检测350

五、抗体的纯化352

第二节 抗原抗体反应与应用354

一、凝集反应354

二、免疫扩散357

三、免疫电泳359

四、固相免疫吸附（含ELISA）363

五、免疫微球测定370

思考题372

参考文献373

第十八章 气相色谱374

第一节 基本原理374

一、常用术语374

二、塔板与速率理论376

第二节 气相色谱仪的构造379

一、载气流速的控制和测量380

二、进样系统380

三、恒温室380

四、色谱柱380

五、检定器384

第三节 操作385

一、操作要点385

二、条件的选择386

第四节 定性和定量检测386

一、定性检测386

二、定量检测387

第五节 应用390

一、分析蛋白质和氨基酸390

二、分析核酸391

三、分析糖类物质391

四、分析脂肪酸392

五、分析农药392

思考题392

参考文献392

第十九章 分光光度法393

第一节 基本原理393

一、光谱393

二、物质结构与光谱的关系394

三、光吸收的基本规律——比尔-朗伯定律396

第二节 分光光度计的结构及类型397

一、主要结构397

二、类型400

第三节 应用402

一、定性分析402

二、含量测定404

三、参数测定409

四、物质结构的分析410

思考题410

参考文献411

第二十章 离心法412

第一节 基本原理412

一、沉降现象412

二、离心力413

三、离心法413

四、沉降系数415

第二节 离心机的类型及构造416

一、制备型离心机416

二、分析型离心机419

第三节 应用419

一、离心机的操作概述419

二、应用实例421

三、测定沉降系数423

四、分离纯化生命物质424

思考题424

参考文献425

参考文献426

附录435

中英文缩写词448