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第一编　概述3

第一章　生命大分子物质的制备3

第一节　材料的选择与处理3

一、材料选择3

二、材料处理4

第二节　测定方法的确立5

一、目的与要求5

二、常用的测定方法5

第三节　细胞破碎8

一、机械破碎8

二、溶胀和自溶9

三、化学处理9

四、生物酶降解9

第四节　抽提10

一、抽提的含义10

二、抽提有效成分的影响因子10

第五节　浓缩13

一、沉淀法13

二、吸附法13

三、超过滤法13

四、透析法14

五、减压蒸馏法14

六、冰冻干燥法14

第六节　纯化方案的设计与评价14

一、纯化方案的设计15

二、纯化方案的评价16

第七节　有效成分纯度和性质的分析17

第八节　应用实例17

一、高纯度人转铁蛋白的制备17

二、叶绿体的提取与4.5S RNA的制备17

三、细菌质粒DNA的提取17

思考题18

参考文献18

第二编　纯化方法21

第二章　沉淀法21

第一节　基本原理与沉淀类型21

一、基本原理21

二、制备蛋白质21

三、制备核酸30

第二节　应用实例33

一、脾磷酸二酯酶的纯化33

二、细菌染色体DNA的制备33

三、蔗糖酶的初步纯化34

思考题34

参考文献35

第三章　吸附层析36

第一节　吸附柱层析37

一、常用术语37

二、基本原理38

三、吸附剂39

四、洗脱液42

五、层析柱的制备与层析操作42

六、应用与实例44

第二节　薄层层析46

一、操作及注意事项47

二、应用实例52

第三节　聚酰胺薄膜层析53

一、基本原理53

二、应用实例54

思考题57

参考文献58

第四章　疏水层析59

第一节　基本原理59

一、疏水作用59

二、吸附剂60

第二节　操作与应用60

一、层析柱的制备60

二、加样与洗脱61

三、应用实例61

思考题63

参考文献63

第五章　离子交换层析64

第一节　基本原理64

第二节　离子交换剂的分类及性质66

一、分类66

二、性质72

第三节　离子交换剂与缓冲液的选择79

一、离子交换剂的选择79

二、缓冲液的选择80

三、加样量的确定83

第四节　操作83

一、离子交换剂的处理、再生和转型83

二、分离物质的交换84

三、物质的洗脱与收集85

第五节　应用87

一、制备、纯化生命物质87

二、测定蛋白质的等电点90

思考题90

参考文献91

第六章　凝胶过滤92

第一节　凝胶的分类及性质92

一、葡聚糖凝胶93

二、琼脂糖凝胶95

三、聚丙烯酰胺凝胶96

四、Sephacryl97

五、Superdex98

第二节　基本原理98

第三节　操作101

一、凝胶的选择和处理101

二、凝胶柱的制备102

三、加样与洗脱103

四、凝胶柱的再生及保存107

第四节　应用107

一、脱盐和浓缩107

二、分离生命物质108

三、去除热源物质109

四、测定分子质量109

五、其他112

思考题112

参考文献112

第七章　亲和层析113

第一节　基本原理113

第二节　操作115

一、载体的选择115

二、配体的选择116

三、亲和吸附剂的制备117

四、特异性吸附119

五、分离大分子物质121

六、亲和层析柱的再生122

第三节　提高吸附剂的操作容量122

一、在配体和载体间引入“手臂”122

二、增加配体取代的程度124

三、配体与载体衍生物以最少的键连接124

四、载体多孔性的影响124

五、其他125

第四节　应用实例125

一、纯化大分子物质125

二、研究酶的结构与功能128

三、实例129

思考题132

参考文献132

第八章　聚焦层析133

第一节　基本原理133

一、多缓冲剂和多缓冲交换剂133

二、聚焦层析特性134

第二节　操作137

一、多缓冲剂的选择137

二、多缓冲交换剂用量的确定138

三、多缓冲交换剂的处理138

四、样品的准备138

五、加样和洗脱138

六、样品中多缓冲剂的去除139

第三节　应用139

一、分离模型蛋白质139

二、分离复杂物质140

三、鉴定某些酶的性质141

思考题142

参考文献142

第九章　高效液相色谱143

第一节　基本原理144

一、高效液相色谱仪144

二、固定相146

第二节　反相高效液相色谱149

一、固定相、流动相和色谱柱150

二、纯化糖基化白蛋白肽片段152

第三节　应用154

一、定性和定量分析154

二、测定酶活性155

三、测定蛋白质分子质量155

四、分离核酸和蛋白质156

思考题161

参考文献161

第十章　固定化的酶与微生物162

第一节　制备方法162

一、固定化酶162

二、固定化微生物166

第二节　制品的性质166

一、酶的相对活性166

二、活性曲线与最适pH167

三、稳定性168

四、米氏常数169

五、其他169

第三节　应用实例170

一、工业方面170

二、医学方面171

三、生化分析方面171

四、实例173

思考题175

参考文献175

第三编　鉴定方法179

第十一章　标记179

第一节　核酸标记179

一、标记物的制备及类型179

二、非核素标记180

三、核素标记189

四、标记物纯化190

五、探针的鉴定191

第二节　蛋白质标记193

一、非核素标记194

二、核素标记198

三、样品分析的注意要点199

第三节　应用200

一、cDNA组学和蛋白质组学201

二、激酶的磷酸化和脱磷酸化204

三、蛋白质半衰期的测定206

思考题207

参考文献207

第十二章　重组DNA208

第一节　重组DNA的部件208

一、工具酶208

二、载体211

三、目的基因213

第二节　重组218

一、黏性末端连接法218

二、平端连接法220

三、平黏连接法220

四、T-A连接法221

五、同聚物加尾连接法221

六、人工接头连接法221

第三节　DNA扩增223

一、重组DNA导入宿主细胞223

二、重组子的筛选与鉴定225

三、表达产物的纯化228

第四节　应用实例228

一、分离总RNA和mRNA228

二、反转录合成第一链cDNA228

三、PCR扩增及其产物纯化229

四、PCR产物的克隆229

五、重组质粒的提取及分析229

思考题230

参考文献230

第十三章　DNA序列测定231

第一节　双脱氧链终止法231

一、基本原理231

二、载体系统232

三、测序试剂236

四、测序操作238

五、变性电泳241

六、序列读取242

第二节　PCR法243

一、直接测序243

二、循环测序244

第三节　化学降解法245

一、测序原理245

二、具体操作246

第四节　应用与进展249

一、应用实例249

二、测序进展250

思考题251

参考文献251

第十四章　生物芯片252

第一节　基因芯片252

一、基本原理和工作流程252

二、制备及操作255

三、应用实例260

第二节　蛋白质芯片265

一、原理及特点265

二、制备与操作266

三、应用实例268

第三节　芯片实验室271

一、结构与制作271

二、应用实例274

思考题280

参考文献280

第十五章　聚合酶链反应281

第一节　基本原理281

一、反应系统281

二、反应过程及条件285

第二节　PCR的类型288

一、普通PCR288

二、原位PCR288

三、反转录PCR289

四、反向PCR290

五、不对称PCR290

六、巢式PCR290

七、彩色PCR291

第三节　应用291

一、筛选目的基因291

二、直接测序292

三、标记DNA探针292

四、寻找新基因292

五、检测环境中的致病菌与指示菌292

思考题293

参考文献293

第十六章　细胞凋亡的检测294

第一节　基本原理与主要特性294

一、基本原理295

二、主要特性304

第二节　检测凋亡的方法306

一、形态学306

二、DNA片段308

三、酶活性与组蛋白310

四、流式细胞仪312

第三节　应用314

一、抗肿瘤药物的研究和开发314

二、疾病的诊断和治疗314

思考题316

参考文献316

第十七章　生物传感器317

第一节　基本原理317

一、离子选择电极318

二、生物活性材料319

第二节　类型与制备319

一、类型319

二、制备320

第三节　应用321

一、工业方面321

二、医学方面321

三、环境监测方面322

思考题323

参考文献323

第十八章　电泳324

第一节　泳动度概论325

第二节　聚丙烯酰胺凝胶电泳327

一、基本原理327

二、不连续垂直柱状凝胶电泳333

三、不连续垂直板凝胶电泳343

四、连续的盘状凝胶和垂直板凝胶的电泳344

五、线性和阶梯式梯度的柱状及板状凝胶电泳346

六、双向电泳347

第三节　琼脂糖凝胶和半干式聚丙烯酰胺凝胶的电泳349

一、琼脂糖凝胶电泳350

二、质粒DNA分子质量的测定352

三、半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳353

第四节　变性聚丙烯酰胺凝胶电泳354

一、SDs-聚丙烯酰胺凝胶电泳354

二、尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳356

三、SDS-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳357

第五节　聚丙烯酰胺凝胶电聚焦358

一、基本原理358

二、载体两性电解质的理化性质359

三、载体两性电解质的pH范围与用量选择360

四、测定蛋白质的等电点360

第六节　毛细管电泳364

一、基本原理与类型364

二、电泳装置367

三、应用实例369

第七节　印迹法（转移电泳）373

一、基本原理373

二、操作及注意事项（以蛋白质为例）374

三、应用376

思考题377

参考文献377

第十九章　免疫分析378

第一节　抗体的性质、制备及纯化378

一、抗体的性质378

二、多克隆抗体的制备379

三、单克隆抗体的制备384

四、抗体的检测388

五、抗体的纯化391

第二节　抗原抗体反应393

一、凝集反应393

二、免疫扩散396

三、免疫电泳398

四、固相免疫吸附（含ELISA）402

五、免疫微球测定409

思考题414

参考文献414

第二十章　气相色谱415

第一节　基本原理415

一、常用术语415

二、塔板与速率理论417

第二节　气相色谱仪的构造420

一、载气流速的控制和测量420

二、进样系统421

三、恒温室421

四、色谱柱421

五、检定器425

第三节　操作426

一、操作要点426

二、条件的选择427

第四节　定性和定量检测427

一、定性检测427

二、定量检测428

第五节　应用431

一、分析蛋白质和氨基酸431

二、分析核酸432

三、分析糖类物质432

四、分析脂肪酸433

五、分析农药433

思考题433

参考文献433

参考文献434

附录443

中英文缩写词456