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第一章 组织培养1

第一节 基本培养技术1

一、基本操作和培养技术1

二、常规组织培养法15

三、特殊组织培养法18

第二节 组织培养用液24

一、水24

二、平衡盐溶液25

三、常用试剂27

四、常用培养液30

第三节 传代细胞的培养34

一、贴壁细胞的传代培养34

二、悬浮细胞的传代培养36

第四节 细胞克隆技术36

一、低密度细胞悬液的制备37

二、多孔板克隆细胞法37

三、Puck法检测克隆形成率38

四、软琼脂克隆形成法39

五、琼脂平板克隆培养39

六、饲细胞层克隆法40

第五节 各种器官组织的培养40

一、神经组织细胞的培养40

二、动脉壁平滑肌细胞培养43

三、骨髓细胞的培养44

四、人表皮细胞的培养45

五、气管上皮细胞的培养46

六、乳腺上皮细胞的培养48

七、血管内皮细胞的培养49

八、肝细胞的培养51

九、胰岛组织的培养52

第六节 组织培养技术的应用研究54

一、药物测试中的组织培养55

二、杂交瘤技术中的细胞培养59

三、组织培养技术的其他应用64

第二章 组织化学67

第一节 概述67

一、组织化学的基本概念67

二、组织化学技术的基本要求67

第二节 组织化学标本的制备68

一、组织的固定68

二、组织切片的制备70

第三节 光镜组织化学72

一、多糖的显示72

二、核酸的显示法75

三、脂类的显示78

四、醛复红染色法82

五、酶类的显示法83

第四节 电镜组织化学110

一、电镜组织化学的基本程序110

二、糖类的电镜组织化学111

三、脂类的电镜组织化学114

四、酶类的电镜组织化学115

第三章 免疫组织化学140

第一节 概述140

一、免疫组织化学的基本概念140

二、免疫组织化学技术的基本要求140

第二节 抗原与抗体141

一、抗原141

二、抗体141

第三节 免疫组织化学技术的原理142

一、免疫荧光技术143

二、免疫酶技术144

三、亲合素－生物素技术146

四、免疫胶体金技术147

第四节 免疫组织化学标本的制备148

一、组织的固定148

二、组织包埋和切片149

第五节 免疫组织化学染色程序150

一、光镜免疫组织化学单标记染色程序151

二、光镜免疫组织化学双标记染色程序156

三、电镜免疫组织化学单标记染色程序159

四、电镜免疫组织化学双标记染色程序162

第六节 抗原修复的应用166

一、抗原化学修复法166

二、抗原物理化学修复法166

第四章 原位杂交组织化学169

第一节 原位杂交的基本程序169

一、组织取材与处理169

二、杂交前处理170

三、杂交反应171

四、杂交后处理173

五、杂交体的检测173

六、对照试验174

第二节 原位杂交技术的操作程序174

一、细胞和组织切片的制作174

二、预杂交（以双链探针检测DNA为例）177

三、杂交反应178

四、杂交后处理178

五、标记与检测178

六、地高辛标记探针原位杂交的操作程序182

第三节 原位杂交结合免疫组织化学双标记183

一、同位素原位杂交与免疫组织化学PAP结合法184

二、地高辛标记与免疫组织化学PAP结合法185

三、PCR与原位杂交结合法187

第四节 双重标记原位杂交188

一、射性同位素和非放射性标记探针结合的双重标记原位杂交188

二、非放射性标记探针的双重标记原位杂交189

第五节 薄片组织和整体组织原位杂交190

一、薄片组织的原位杂交190

二、整体组织原位杂交191

第六节 电镜原位杂交195

一、电镜原位杂交基本操作步骤195

二、蛋白A－金－生物素标记DNA探针电镜原位杂交195

三、地高辛标记rRNA探针电镜原位杂交197

四、同位素标记cRNA探针电镜原位杂交199

五、电镜原位杂交应注意的问题199

第五章 定量组织化学技术201

第一节 目测定量术201

第二节 显微分光光度术202

一、显微分光光度计的原理202

二、显微分光光度计的组成202

三、显微分光光度计测量的基本方法203

第三节 图象分析系统204

一、图象分析系统的基本原理205

二、图象分析系统的组成205

三、图象分析系统的工作程序206

第六章 流式细胞术和激光扫描共聚焦显微术213

第一节 流式细胞术213

一、概述213

二、流式细胞仪的工作原理213

三、流式细胞仪的功用214

四、流式细胞仪样本的制备214

五、染色方法216

六、人外周血T淋巴细胞亚群的检测218

七、DNA倍体分析219

八、Bcl－2基因蛋白的分析219

第二节 激光扫描共聚焦显微术220

一、仪器系统组成220

二、工作原理220

三、主要特性220

四、基本功能222

五、几种荧光染色法225

第七章 凋亡细胞的检测231

第一节 凋亡细胞的形态学检测231

一、光学显微镜观察法232

二、透射电子显微镜观察法235

第二节 凋亡细胞的流式细胞术检测236

一、PI染色法237

二、Hoechst－PI染色法238

三、荧光素标记测定法239

四、Annexin法241

第三节 凋亡细胞的TUNEL法检测241

一、过氧化物酶标记测定法241

二、荧光素标记测定法244

三、生物素－dUTP/酶标亲和素测定法246

第四节 细胞凋亡相关蛋白和酶的检测248

一、Fas抗原的检测248

二、Bc1－2蛋白的检测250

三、P53蛋白的检测250

四、caspase3活性的检测251

五、PARP活性的测定252

第五节 细胞凋亡DNA裂解的检测253

一、细胞凋亡DNA裂解的生化检测法253

二、细胞凋亡DNA裂解的免疫化学检测法254

三、细胞凋亡DNA裂解的分子生物学检测法256

附录259

附录一 组织化学常用缓冲液259

附录二 免疫组织化学常用溶液269

附录三 原位杂交组织化学常用溶液284

附录四 中英文名词对照索引289