图书介绍
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- 汪天虹著 著
- 出版社： 北京市：北京大学出版社
- ISBN：9787301144367
- 出版时间：2009
- 标注页数：182页
- 文件大小：14MB
- 文件页数：190页
- 主题词：分子生物学－实验－高等学校－教材
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图书目录
第1章 分子生物学实验原理与技术概述1
第2章 染色体DNA和RNA的制备16
实验2.1 细菌染色体DNA的提取16
实验2.2 酵母染色体DNA的提取20
实验2.3 SDS裂解法提取丝状真菌染色体DNA21
实验2.4 RNA的提取23
实验2.5 凝胶电泳进行DNA分离纯化29
实验2.6 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定35
第3章 载体的制备41
实验3.1 质粒DNA的提取—碱变性提取法45
实验3.2 λ噬菌体DNA的提取49
实验3.3 λDNA去磷酸化臂的制备52
第4章 重组质粒的构建55
实验4.1 限制性核酸内切酶的酶切反应61
实验4.2 酶切DNA片段的CIP处理64
实验4.3 酶切DNA片段的分离与回收65
实验4.4 载体与外源DNA的连接反应67
第5章 重组DNA导入受体细胞73
实验5.1 感受态细胞的制备及质粒转化74
实验5.2 λ噬菌体载体与外源DNA片段的连接、体外包装与扩增（基因组文库的构建）77
第6章 重组子的鉴定和外源基因的表达81
实验6.1 E.coli转化子的筛选与验证83
实验6.2 Southern印迹杂交86
实验6.3 Northern印迹杂交89
实验6.4 斑点印迹杂交92
实验6.5 外源基因的诱导表达93
实验6.6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白的表达96
实验6.7 Western印迹技术检测重组蛋白的表达101
第7章 在酿酒酵母中克隆表达外源基因104
实验7.1 酵母染色体DNA的提取108
实验7.2 木糖还原酶基因的获得110
实验7.3 重组质粒的构建（酶切连接）112
实验7.4 酵母质粒的小量提取与插人方向验证115
实验7.5 酵母菌LiAc完整转化酵母细胞116
实验7.6 酿酒酵母转化子的验证118
实验7.7 重组酵母木糖还原酶活性的测定120
实验7.8 重组酵母菌株发酵实验及发酵产物分析121
第8章 丝状真菌的转化与转化子的筛选123
实验8.1 瑞氏木霉原生质体的制备与转化实验128
实验8.2 瑞氏木霉原生质体电转化实验132
实验8.3 农杆菌介导的瑞氏木霉转化134
实验8.4 振荡破壁法快速小量提取瑞氏木霉染色体DNA136
实验8.5 瑞氏木霉潮霉素抗性转化子的PCR鉴定138
第9章 PCR技术原理与应用141
实验9.1 PCR扩增目的片段151
实验9.2 一步法RT-PCR155
实验9.3 两步法RT-PCR158
第10章 工程菌的培养与目标产物的分离161
实验10.1 重组E.coli诱导表达外源内切β-1，4-葡聚糖酶163
实验10.2 从E.coli中提取纯化目的重组蛋白165
附录168